ИММУНОБЛОТТИНГ

Иммуноблоттинг (син. вестернблоттинг) — высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА.
Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.

Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их (блоттинг - от англ. blot, пятно) из геля на активированную бумагу(1) или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с “блотами” антигенов*. На эти полоски наносят сыворотку больного(2). Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом(3). Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата(4), изменяющего окраску под действием фермента.

* Метод переноса пятен ДНК первоначально разработал Сазен (Southern) - фамилия означает южный; метод получил название сазенблоттинг (южный перенос). Метод переноса фрагментов ДНК называют нозенблоттинг (северный перенос), а метод переноса фрагментов белка - вестернблоттинг (западный перенос).